柱层析
极性小的用乙酸乙酯：石油醚系统 极性较大的用甲醇：氯仿系统
极性大的用甲醇：水：正丁醇：醋酸系统
拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸
硅胶柱层析
下面介绍我现在惯用的方法：匀浆法。
1。称量。200-300目硅胶，称30-70倍于上样量；如果极难分，也可以用100倍量的硅胶h。
干硅胶的视密度在0.4左右，所以要称40g硅胶，用烧杯量100ml也可以。
2。搅成匀浆。加入干硅胶体积一倍的溶剂用玻璃棒充分搅拌。如果洗脱剂是石油醚/乙酸乙酯/丙酮体系，就用石油醚拌；如果洗脱剂是氯仿/醇体系，就用氯仿拌。如果不能搅成匀浆，说明溶剂中含水量太大，尤其是乙酸乙酯/丙酮，如果不与水配伍走分配色谱的话，必须预先用无水硫酸钠久置干燥。氯仿用无水氯化钙干燥，以除去1%的醇。如果样品对酸敏感，
不能用氯仿体系过柱。
3。装柱。将柱底用棉花塞紧，不必用海沙，加入约1/3体积石油醚（氯仿），装上蓄液球，打开柱下活塞，将匀浆一次倾入蓄液球内。随着沉降，会有一些硅胶沾在蓄液球内，用石油
醚（氯仿）将其冲入柱中。 4。压实。沉降完成后，加入更多的石油醚，用双联球或气泵加压，直**流速恒定。柱床约被压缩**9/10体积。无论走常压柱或加压柱，都应进行这一步，可使分离度提高很多，且可
以避免过柱时由于柱床萎缩产生开裂。
5。上样。干法湿法都可以。海沙是没必要的。上样后，加入一些洗脱剂，再将一团脱脂棉
塞**接近硅胶表面。然后就可以放心地加入大量洗脱剂，而不会冲坏硅胶表面。 6。过柱和收集。柱层析实际上是在扩散和分离之间的权衡。太低的洗脱强度并不好，推荐用梯度洗脱。收集的例子：10mg上样量，1g硅胶h，0.5ml收一馏分；1-2g上样量，50g
硅胶（200-300目），20-50ml收一馏分。
7。检测。要更多地使用专用喷显剂，如果仅用紫外灯，会损失较多产品，紫外的灵敏度一
般比喷显剂底1-2个数量级。8。送谱。收集的产品旋干，在送谱前通常需要重结晶。如果样品太少或为液体，可过一小
凝胶柱，作为送谱前的**后纯化手段。可除去氢谱1.5ppm左右所谓的“硅胶”峰。
1.先根据tlc方法筛选好洗脱剂，使两相邻物质rf值之差**大化
2.将柱子必须装平整、均匀 3.考虑有限柱填料的吸附量 4.可考虑用剃度法分开并洗脱
关于柱子的尺寸，应该是粗长的**好。
柱子长了，相应的塔板数就高。柱子粗了，上样后样品的原点就小（反映在柱子上就是 样品层比较薄），这样相对的减小了分离的难度。试想如果柱子十厘米，而样品就有二 厘米，那么分离的难度可想而知，恐怕要用很低极性的溶剂慢慢冲了。而如果样品层只 有0.5厘米，那么各组分就比较容易得到完全分离了。当然采用粗大的柱子要牺牲比较多 的硅胶和溶剂了，不过这些成本相对于产品来说也许就不算什么了（有些不环保的说，
不过溶剂回收重蒸后也就减小了部分浪费）。 现在见到的柱子径高比一般在1：5～10，书中写硅胶量是样品量的30～40倍，具体的选 择要具体分析。如果所需组分和杂质分的比较开（是指在所需组分rf在0.2～0.4，杂质 相差0.1以上），就可以少用硅胶，用小柱子（例如200毫克的样品，用2cm×20cm的柱子 ）；如果相差不到0.1，就要加大柱子，我觉得可以增加柱子的直径，比如用3cm的，也
可以减小淋洗剂的极性等等。
真空液相层析即vacuum liquid chromatography(vlc),即用真空代替压力进行层析，具体方
法可见synthesis,2001,**6,2431-,and j chem edu,1997,10,1222-
干法上样，一般用于固体或粘度大的液体样品。样品用低沸点易溶溶剂溶解，加入1-3倍的粗硅胶，晾干或旋干，干燥的标准是硅胶成细粉而不粘在瓶壁上。装好的柱子上留一段溶剂，把吸附了样品的硅胶慢慢到进去，震动柱子或再加一些溶剂，把粘在柱壁上的硅胶洗下
